显微摄影是通过显微镜进行拍照的一种技术方法。

显微镜下的蚕豆叶表皮

　　显微镜是一种观察微观事物的重要光学仪器。利用它的高倍放大作用可以观察到肉眼直接看不到的信息。显微摄影又可以把显微镜观察到的现象记录下来，供人们更广泛的研究。

　　显微镜分为光学显微镜和非光学显微镜两类。（非光学显微镜有电子显微镜、超声波显微镜等）

　　普通光学显微摄影装置就是将普通相机与显微镜组合在一起，利用相机记录本来由人眼观察的显微图像。

　　光学显微摄影机械装置的调整

　　机械装置的调整对做好显微摄影工作也很重要，特别是抽筒的长度要确切，否则倍率不准， 如用油镜头拍摄时抽筒要拉至170毫米处，拍摄不透明标本，要根据其厚度将抽筒拉出在190 ～250毫米范围内。对标本和盖片玻璃的厚度也有严格要求。

　　调焦时要注意先扭旋大螺旋于标本近处，然后自下而上移动，初步调清后，再微调小螺旋， 直至最清晰。切不可自上向下对焦或是直接用大螺旋调焦。

　　移动聚光器时要依据亮度的需要。无论拍低位或高位，都要首先用低倍的接物镜对焦、对光 。对光时把聚光器升到最高点，然后调整反光镜或光源光束，使最亮部分处于视野中心并使 其亮度均匀，再转换所需要的高倍镜。调好焦点后，将聚光器下降至焦点与景深合适时为止 。在使用油物镜时，要将集光器升至最高，与载片吻接，并点油使其与标本、物镜构成一个 光具组。

　　显微摄影中还要注意光学与机械装置的配合，否则不是光线不均匀就是倍率不准确或是分辨 率不强。所以，必须要求：

• 显微摄影装置必须放置平稳，组合照相装置、显微镜、光具组时要注意光路合轴。
• 将标本切片放在载物台上，用低倍调焦后作光束合轴调整。调整时先把虹彩光阑、光 源光阑开到最大，集光器调至最高，在目镜上检视成像情况。如果太亮，可用深色滤色镜减弱强光。
• 将物镜调至所需要的倍率，收缩光源光阑和集光器光阑。集光器下降至适当位置，集 光器高时，视场明亮、景深短；集光器低时，视场暗、景深长。由于在显微摄影中，景深长 有可能将玻璃片或聚光器上的脏东西也呈现在画面上，所以长的景深也不宜采用。
• 成像面必须平行于标本平面，否则倍率不准、影像也会变形。

光学显微摄影的用光

光学显微摄影必须要有明亮、均匀、无反光的照明，同时要注意光源的调节和色温的变化。 另外，由于样品的性能差异，还要选用不同的照明方法。下面我们从两方面介绍一下光学显 微摄影的用光。

（1）光源

光学显微摄影的照明，会对物镜解像力产生明显影响，一般要求光源的输出能够集中到 很小面积上，光强高、热量小，几何尺寸不大。

在一般明视场照明显微摄影时，通常采用6伏或者12伏螺口形白炽钨丝灯泡做照明光源，色温为2700～3200K，其亮度的调整由变压器实现，这种照明尽管看上去很亮，色温并不高，所以，应尽量用最高电压，使灯光亮度、色温提高，并使用RAW格式拍摄，以便后期校正色温。

但是，白炽钨丝灯泡长期使用，其钨丝蒸发后所产生的沉物会积聚在玻璃罩内壁，这样会降低亮度与色温。所以，12伏100瓦的卤素钨丝灯光便成了光学显微摄影的优质光源。（这种卤素钨丝灯在灯管内充卤素气体，在灯丝点燃后，蒸发出来的钨会与卤素气体形成卤化钨，附着在灯管内壁，而关闭电源冷却时，卤化钨又会分解，届时钨又回到灯丝上去，这样便延长了灯泡的使用寿命 ，改善了光源照明，缩小了灯泡的几何尺寸，提高了光源强度）。

用于光学显微摄影的光源还有氙灯、锆灯、电子闪光灯、汞蒸气灯等，可以根据不同的目的，选用适当的光源。如氙灯不仅可以发出连续的可见光，还包含长波紫外线和红外光谱部分；汞蒸气是优质的单色光源，特别适于单色黑白显微摄影。

（2）光学显微摄影的用光方法

拍摄显微照片，要求有明亮、均匀、无反光的照明条件，其照明方法可分为两类，即透射照明和反射照明（落射光照明）

透射照明

反射照明

透射光照明是指从光源射出的光线从标本的下面透过标本进入物镜。而落射照明是指光线从正面投射到标本的正面，物镜接受的光是从标本反射来的光。

透射光照明通常按照克列尔（Kohler）照明法调节光路便可以获得优质效果。

使用时调节光源光阑和距离使照明光束投射到反光镜中央。关闭聚光镜光阑，移动光源透镜 ，使灯丝清晰地在聚光镜的孔径光阑平面成像。先将样品聚焦，随后从载物台上除去标本， 通过目镜对焦，上下移动对焦器，直到标本平面上出现光源光阑的像。聚光器光阑通常收缩 至0.6～0.7厘米（直径），与光源光阑配合，除去光斑得到鲜明的像。在高倍显微摄影时， 要一面收缩聚光器光阑，一面观察，使出现的灯丝像达到最大，大约使光源距离距显微镜达 40-50cm为好。

落射光照明主要用于拍摄不透明的标本，如皮肤、小生物、植物果实表面等。拍出的像有立体感。落射光与物镜之间的角度越小越好，现代显微摄影装置的落射光大多与物镜合轴。 在没有专业设备的情况下可以用斜射照明，在对应面加反光屏，或用另一只灯做辅助光，也可以使用环形闪光灯。

光学显微摄影中滤色镜的应用

滤色片几乎在拍摄什么样的标本都有用场。例如：

• 用滤色片校正反差突出重点光学显微摄影往往要突出重点，这就要使用适当的滤色镜加强反差，强调需要突出的重点结 构 ，而减弱其非重点部分。使用标本染色补色的滤色镜可以增强标本反差，比如苏木精染出的 色标本中用绿滤色镜，就可增强反差。
• 两种颜色的结构体现： 如果想使标本中两种以上的颜色都清楚地呈现在画面上，如红、蓝两种颜色，可以采取两次 曝光的方法，先用红滤色镜，再用蓝滤色镜各曝一次光，就可以清楚地体现两种颜色的结构 。
• 短波光滤色镜可以提高对标本的分辨率。 短波光滤色镜（如UV镜）可以分辨出在可见光下肉眼看不见的组织结构。用紫外线滤色片配合紫外胶片可提高成像可分辨，达到560～1000线/毫米。 紫外线光源的射线很热，采用一般滤色片容易烤焦标本，所以要用液体滤光器，其 内装有氯化铜或硫酸铜溶液30克/升。这不仅可以防热、吸收红外线尚可让紫外线通过。

 

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